Сердце, логотип
www.CARDIOGENES.dp.ua
строение и развитие сердечно-сосудистой системы
Кардиогенез :: Онтогенетический аспект развития сократительного…
 
Морфология развивающегося сердца
(Морфология развивающегося сердца (структура, ультраструктура, метаболизм). Днепропетровск, 1995)
[ ⇐ назад | вперед ⇒ ]

Часть 4. Сопоставительный и математический анализ структурно-функциональных характеристик развивающегося миокарда

4.1. Онтогенетический аспект развития сократительного аппарата сердца

с.169-193
И.В.Твердохлеб

Как показал морфологический анализ развития амфибий, в раннем зародышевом периоде кардиомиоцитам присуща разнонаправленность морфогенетических процессов, о чем свидетельствуют развитый секреторный аппарат - гладкий эндоплазматический ретикулум и комплекс Гольджи,- а также наличие в цитоплазме пучков сократительных нитей. Эти данные хорошо согласуются с представлениями П. П. Румянцева (1982) о секреторной активности кардиомиоцитов в раннем онтогенезе. В зародышевом периоде, наряду с низким содержанием в цитоплазме сократительных структур и митохондрий, отмечается значительная концентрация желточных и липидных включений, которым отводится ведущая роль в энергообеспечении растущего миокарда (В.И.Волков, 1982).

Ранний личиночный период, связанный с началом двигательной активности, характеризуется активным миофибрилло - и саркомерогенезом. Установлено, что миофибриллы, наращивание которых происходит от вещества вставочных дисков, имеют более дифференцированное строение и, по-видимому, играют ведущую роль в сократительной активности клетки.

Секреторная функция кардиомиоцитов в течение раннего личиночного периода резко уменьшается (за счет снижения выраженности в цитоплазме каналов гладкого эндоплазматического ретикулума и комплекса Гольджи). Дальнейшая дифференцировка миокарда продолжается в направлении выработки специфических белков. Подтверждением этому служат данные дисперсионного анализа, указывающие на существенное влияние фактора времени на плотность упаковки миофибрилл и другие стереологические параметры сократительного аппарата.

До начала 2-го месяца личиночного развития мы наблюдали слабую положительную корреляционную связь между относительным объемом миофибрилл и митохондрий. Регрессионный анализ выявил несущественную взаимозависимость этих параметров. В этот период обнаружена сильная обратная корреляционная взаимосвязь между относительным объемом миофибрилл и плотностью упаковки желточных и липидных включений, свидетельствующая, на наш взгляд, о высокой энергоемкости синтетических процессов, происходящих в сократительном аппарате кардиомиоцита.

Следует отметить, что динамике абсолютной удельной поверхности миофибриллярного аппарата, наиболее активно изменяющейся до 7-х суток личиночного развития, соответствует максимальная скорость увеличения плотности упаковки миофибрилл. Указанная корреляция обусловлена быстрым накоплением тонких сократительных структур, имеющих значительную площадь поверхности. В это время сила влияния фактора времени на стереологические параметры миофибриллярного аппарата максимальна за весь личиночный период развития. В дальнейшем количество миофибрилл не изменяется, но нарастает их толщина за счет включения элементарных нитей, что согласуется с данными Huang (1967). Таким образом, до 7-х суток личиночного развития рост сократительного аппарата происходит по интенсивному типу, для которого характерно увеличение количества миофибрилл без значительного изменения их толщины.

Степень ориентации миофибрилл активно изменяется вплоть до 20-х суток личиночного развития, тогда как наиболее выраженное увеличение других стереологических параметров миофибриллярного аппарата происходит до 7-х суток развития. В целом, к 20-м суткам личиночного развития строение сократительного аппарата приобретает дефинитивный вид, чему соответствуют незначительные изменения в дальнейшем количественных характеристик миофибриля.

Регрессионный анализ показал, что плотность упаковки миофибрилл и их абсолютная удельная площадь поверхности до 7-х суток личиночного развития хорошо описываются обращенной параболой 2-го порядка, степень ориентации миофибрилл на 4-й неделе жизни аппроксимируется обращенной параболой 3-го порядка; дальнейшие изменения стереологических параметров миофибриллярного аппарата носят линейный характер. Относительный объем желточных включений до 10-х суток описывает гипербола 1-го порядка. Убывание плотности упаковки липидов происходит линейно, причем после 7-х суток личиночного развития прямая изменяет направление и имеет более уплощенный вид.

До середины 2-й недели личиночного развития митохондриальный аппарат отличается слабой дифференцированностью. В то же время, обращает на себя внимание увеличение его абсолютной удельной площади поверхности на фоне незначительного возрастания плотности упаковки. Корреляционный анализ обнаружил сильную положительную корреляционную взаимосвязь между относительным объемом митохондрий, степенью ориентации крист и активностью СДГ, а также слабую положительную корреляцию между последними и абсолютной удельной площадью поверхности митохондрий. Подобное соотношение динамики стереологических характеристик и данных корреляционного анализа позволяет предположить, что в указанный период дифференцировочные процессы, происходящие в кардиомиоците, направлены не столько на повышение энерговырабатывающей способности митохондриального аппарата, о чем свидетельствовала низкая активность СДГ, сколько на увеличение количества органелл. Дисперсионный анализ выявил слабое влияние фактора времени на плотность упаковки митохондрий, степень ориентации крист, их количество и активность СДГ в этот период.

На 5-е сутки личиночного развития происходит разделение миокарда на трабекулярный, губчатый и компактный слои. Обособление губчатого слоя, образующего синусоиды, по мнению О.Б.Волковой, М.И.Пекарского (1976), вызвано необходимостью адекватного обеспечения миокарда питательными веществами, которое осуществляется непосредственно из полости желудочка. Учитывая состояние основных стереологических параметров - плотности упаковки миофибрилл и митохондрий, их абсолютной удельной площади поверхности и степени ориентации, относительного объема гликогена и липидных включений - в различных слоях миокарда, мы сделали вывод о ведущей роли трабекулярного миокарда в сократительной активности органа.

В составе популяции кардиомиоцитов обнаружены клетки, отличающиеся по уровню развития миофибриллярного и митохондриального компартментов и выраженности секреторного аппарата, подобные описанным Б.И.Волковым (1982) "темным" и "светлым" кардиомиоцитам. Статистический анализ выявил существенное варьирование стереометрических параметров, в частности, увеличение коэффициента вариации, что в большей степени характерно для трабекулярного миокарда. Таким образом, функционально ведущий слой определяется относительным количеством клеток, которым присущи активные процессы синтеза специфических белков.

С 10-х по 30-е сутки происходит быстрая дифференцировка митохондриального аппарата, о сопряженности структурно-функциональных сторон, которой свидетельствует сильная положительная корреляционная зависимость между динамиками плотности упаковки митохондрий и количества крист, а также между степенью ориентации крист и активностью СДГ. Наиболее сильная корреляция между относительным объемом митохондрий и активностью СДГ наблюдается только в течение 20-30-х суток личиночного развития, а между степенью ориентации крист и активностью СДГ сильная положительная корреляционная взаимосвязь сохраняется до 50-х суток жизни. Таким образом, в кардиогенезе лягушки структурная дифференцировка митохондриального аппарата, связанная с увеличением его относительного объема, заканчивается раньше и является основой для дальнейших качественных изменений митохондрий - усиления степени ориентации крист и нарастания активности СДГ.

Необходимо отметить, что возрастание абсолютной удельной площади поверхности энерговырабатывающего компартмента происходит в этот период более медленными темпами, что, понашему мнению, указывает на ослабление пролиферативной активности митохондрий. Судя по динамике относительного объема митохондрий, срок окончания морфологической дифференцировки митохондриального аппарата приходится на конец 1-го месяца личиночного развития; тем не менее, активность СДГ продолжает существенно увеличиваться вплоть до 50-х суток, В этот период наблюдается сильная прямая корреляционная взаимосвязь между последней, степенью ориентации крист и их количеством. Таким образом, плотность упаковки митохондрий не является параметром, в полной мере отражающим уровень структурного развития митохондриального аппарата, более детальная характеристика, которого может быть осуществлена при анализе таких стереологических параметров, как степень ориентации крист и их количество.

Двухфакторный дисперсионный анализ выявил более существенное влияние временного фактора в течение 10-50 суток личиночного развития на стереометрические параметры митохондриального аппарата и активность СДГ по сравнению с влиянием плотности упаковки миофибрилл. Регрессионный анализ выявил существенную взаимозависимость между относительными объемами миофибрилл и митохондрий на 2-м месяце личиночного развития, В течение 2-10 недель личиночного развития динамики большинства параметров, характеризующих развитие митохондриального аппарата, - плотности упаковки митохондрий, их абсолютной удельной площади поверхности, количества крист, активности СДГ - аппроксимируются логистической функцией. Степень ориентации митохондриальных крист до 50-х суток развития описывается параболой 5-го порядка, и в дальнейшем изменяется линейно.

Миофибриллярно-митохондриальный индекс до 10-х суток развития изменяется в зависимости от временного фактора по обращенной параболе 2-го порядка. Точка максимума этой функции во всех слоях миокарда наблюдается на 7-е сутки личиночного развитая. В течение 3-4-й недели жизни происходит линейное снижение этого параметра, сменяющееся слабо выраженным нарастанием, свидетельствующим о синхронизации процессов развития сократительного и митохондриального аппаратов в позднем личиночном развитии.

Относительный объем гликогена медленно увеличивается до 30-х суток и резко возрастает к 50-м, когда темпы накопления объема миофибрилл и митохондрий являются наиболее низкими за весь личиночный период. Важно отметить, что в миокарде лягушки количество гликогена зависит от степени дифференцированности сократительного и митохондриального компартментов и их функциональной активности: существенное увеличение относительного объема гликогена происходит при замедлении анаболических реакций на фоне структурно-функциональной зрелости миофибриллярного и митохондриального аппаратов кардиомиоцита. Подтверждением этому служит также неодинаковая способность компактного и трабекулярного слоев миокарда накапливать гликоген. Трабекулярный миокард, отличающийся более высоким уровнем синтетических процессов и сократительной активности вплоть до метаморфоза, содержит меньшее количество гликогена. Таким образом, плотность упаковки гликогена является косвенным критерием, позволяющим определить сроки завершения морфофункциональной дифференцировки миофибриллярного и митохондриального аппаратов.

Количество липидов постоянно снижается в ходе личиночного развития. Наибольшая активность этого процесса наблюдается в периоды максимальных темпов возрастания относительного объема миофибрилл (с 3-х по 7-е сутки) и митохондрий (с 20-х по 30-е сутки). В указанные периоды отмечается сильная отрицательная корреляция между плотностью упаковки липидов и относительным объемом одного из основных структурно-функциональных компартментов кардиомиоцита. Регрессионный анализ подтвердил существенную взаимозависимость между плотностью упаковки липидов и относительным объемом миофибрилл в раннем личиночном периоде, а также между первой и плотностью упаковки с 20-х по 30-е сутки развития. Очевидно, возрастные изменения относительного объема митохондрий и миофибрилл в миокарде амфибий являются фактором, определяющим динамику плотности упаковки липидов.

Таким образом, изучение состояния стереологических параметров миокарда амфибий в раннем онтогенезе, а также данные дисперсионного, корреляционного и регрессионного анализа позволяют выделить следующие периоды в развитии миофибриллярного и митохондриального аппаратов. Первый период, отмеченный преимущественной дифференцировкой сократительных элементов и наиболее выраженным расходованием энергетических ресурсов, наблюдается с 3-х по 20-е сутки развития. Второй период, охватывающий временной интервал 20-30-е сутки, характеризуется активной структурно-функциональной дифференцировкой митохондриального аппарата и значительным снижением величины миофибридлярно-митохондриального индекса. Третий, наблюдаемый с 30-х по 70-е сутки личиночного развития, - связан с синхронной морфологической дифференцировкой миофибриллярного и митохондриального аппаратов и завершением биохимического созревания митохондрий к 50-м суткам.

Итак, изучение ряда стереологических параметров кардиомиоцитов лягушки в ходе индивидуального развития, их обработка методами дисперсионного, корреляционного и регрессионного анализа и сопоставление результатов с данными литературы позволяют выявить периодизацию в становлении миофибриллярного и митохондриального аппарата миокарда, а также определить взаимосвязь между этими процессами.

При исследовании сердца птиц, полученные нами данные об электронно-микроскопическом строении кардиомиоцитов на ранних сроках инкубации, в целом, совпадают с рядом литературных источников (Linder, I960; Holzter et al. 1961; Olivo et al. 1964; Uanasek, 1968). Стереологический анализ показал, что относительный объем митохондрий в этот период более чем четырехкратно превышает плотность упаковки сократительных структур, что хорошо согласуется со сведениями Bozner (1976), Bozner et al, (1980).

Дифференцировка трабекулярного миокарда, обособление которого наблюдается на 3-й сутки инкубации, происходит более быстрыми темпами, о чем мы судили по более активному увеличению плотности упаковки миофнбрилл и митохондрий по сравнению с губчатым и компактным слоем. Различие в скорости развития митохондриального аппарата разных слоев миокарда является гораздо менее выраженными, чем отличия в плотности упаковки сократительного аппарата. Регрессионный анализ выявил то обстоятельство, что в трабекулярном миокарде взаимозависимость между динамикой плотности упаковки миофибрилл и митохондрий существенно меньше, чем в губчатом и компактном слоях.

О быстрой дифференцировке митохондриального аппарата в этот период свидетельствуют сдвиги в значениях степени ориентации крист и абсолютной удельной площади поверхности, существенно превосходящие таковые миофибриллярного аппарата. Дисперсионный анализ показал, что сила влияния фактора времени на большинство стереологических параметров в этот период составляет более 80 %.

Различия в скорости дифференцировки слоев миокарда отразились на накоплении жировых и, в большей степени, гликогеновых включений, объем которых меньше в трабекулярном миокарде.

Дальнейшие исследования позволили выделить два периода в пренатальном развитии основных структурно-функциональных компартментов кардиомиоцита. Первый период, наблюдаемый до 12-х суток инкубации, характеризуется активной дифференцировкой митохондриального аппарата: резким увеличением абсолютной удельной площади поверхности до 8-х суток, отражающим быстрое размножение митохондрий; значительным возрастанием плотности упаковки, степени ориентации крист и активности СДГ, изменения которых наиболее выражены с 8-х по 12-е сутки. В указанный период наблюдается сильная положительная корреляционная зависимость между всеми количественными характеристиками, отражающими развитие митохондриального аппарата. Двухфакторный дисперсионный анализ установил более существенное влияние на стереологические параметры митохондриального аппарата и активность СДГ в этот период временного фактора по сравнению с плотностью упаковки миофибрилл. Обращает на себя внимание то обстоятельство, что до 8-х суток эмбриогенеза изменения абсолютной удельной площади поверхности митохондрий носят линейный характер; между 8-12-ми сутками наблюдается параболическая зависимость этого параметра от времени; в дальнейшем динамику параметра вновь описывает линейная функция, более наклоненная к оси абсцисс. По нашему мнению, такие временные изменения абсолютной удельной площади поверхности митохондрий свидетельствуют о завершении их активной пролиферации к 8-м суткам эмбриогенеза.

На 8-е сутки инкубации мы наблюдали появление высокоэффективных органелл, количество которых в дальнейшем постоянно возрастает. В литературе нами обнаружены сведения, касающиеся появления двух типов митохондрий кардиомиоцитов только в эмбриогенезе млекопитающих (А.А.Коптева и др., 1972; Б.Г.Шаров, 1988).

Следует отметить, что к 5-м суткам эмбриогенеза в функционально ведущем слое миофибрнялярно-митохондриальный индекс приближается к 1,0, что отражает синхронное развитие сократительного и митохондриального аппаратов на ранних стадиях кардиогенеза. Динамика этого параметра до 12-х суток эмбриогенеза хорошо описывается обращенной параболой 2-го порядка. Полученные нами стереометрические данные, отражающие развитие митохондриального аппарата, хорошо согласуются с литературными источниками (Bozner, 1976, Sisto-Daneo L., Filogamo G. , 1980).

Одновременно с активной дифференцировкой митохондрий происходит накопление энергетических ресурсов - гликогена и липидов. Между их относительным объемом и плотностью упаковки митохондрий в этот период устанавливается сильная положительная корреляционная взаимосвязь. Увеличение количества гликогена и липидов в миокарде в течение эмбриогенеза кур отмечают П.А.Хлопонин (1976), Olivo et al, (1964), Manasek (1968).

В указанный период регрессионный анализ выявил более существенную взаимозависимость между плотностью упаковки миофибрилл и митохондрий в компактном и губчатом слоях по сравнению с трабекулярным. Дисперсионный анализ показал более сильное влияние фактора времени на стереологические параметры митохондриального аппарата и относительный объем липидов и гликогена, чем на количественные характеристики миофибриллярного аппарата. Регрессионные уравнения динамики плотности упаковки митохондрий и активности СДГ аппроксимируются функцией показательного типа; обращенная парабола 2-го порядка описывает динамику относительного объема митохондрий и миофибрилл; линейная функция характеризует изменения других стереологических параметров.

Второй период, временные рамки которого - 12-21-е сутки пренатального развития,- отмечен быстрым увеличением относительного объема миофибрилл, причем их плотность упаковки к концу эмбриогенеза сопоставима с плотность» упаковки митохондрий. Обращает на себя внимание то обстоятельство, что в указанный период коэффициент корреляции между активностью СДГ, степенью ориентации крист и плотностью упаковки миофибрилл приближается к i, а корреляционная взаимосвязь между относительным объемом митохондрий и активностью СДГ является средней силы. Регрессионный анализ выявил существенную взаимозависимость между относительным объемом миофибрилл и активностью СДГ. Установлена также высокая положительная корреляционная связь между основными стереологическими параметрами, характеризующими развитие миофибриллярного аппарата, - степенью ориентации миофибрилл, абсолютной удельной площадью поверхности миофибрилл и их плотностью упаковки, что свидетельствует не только о количественных сдвигах, происходящих в миофибрилдярном аппарате, но и качественных изменениях, направленных на повышение эффективности его функционирования перед началом сократительной активности.

Темпы накопления гликогена и липидов, по сравнению с предшествующим периодом, значительно снижаются. Дисперсионный анализ выявил более сильное влияние фактора времени на плотность упаковки миофибрилл, их степень ориентации и активность СДГ, чем на другие стереометрические характеристики. В указанный период динамика СДГ описывается уравнением показательного типа; изменения других параметров носят линейный характер.

В целом, развитие миофибриллярного и митохондриального аппаратов миокарда в эмбриогенезе кур имеет ряд особенностей. Одна из них - наблюдаемое в течение всего эмбриогенеза превышение относительного объема митохондрий над плотностью упаковки миофибрилл - связана с аэробными условиями существования до рождения. Возможно, что указанная периодизация в развитии основных структурно-функциональных аппаратов миокарда также определяется этим обстоятельством. Таким образом, наиболее активные дифференцировочные процессы, наблюдаемые в митохондриальном аппарате до 12-х суток пренатального развития, предшествуют накоплению сократительных структур и в целом, росту функциональной активности миокарда, причем увеличение количества крист, их степени ориентации и активности СДГ в этот период более выражено, чем нарастание плотности упаковки митохондрии. Бо время быстрого увеличения относительного объема миофибрилл активность СДГ и степень ориентации крист продолжают нарастать, а плотность упаковки митохондрий изменяется мало. По нашему мнению, дифференцировка миофибриллярного аппарата миокарда в эмбриогенезе кур начинается при достижении митохондриальным определенного уровня структурно-функциональной зрелости. Дифференцировка сократительного аппарата в дальнейшем оказывает влияние на рост функциональной активности митохондриального, происходящий, в основном, за счет качественных изменений митохондриальных крист: накоплении на них молекул ферментов, в частности ферментов цикла Кребса, усилении степени ориентации, что способствует оптимальной передаче энергии.

Динамика миофибриллярно-митохондрнального индекса в компактном, трабекулярном и губчатом слоях миокарда в течение пренатального онтогенеза имеет одинаковую направленность: пик ее наблюдается на 5-е сутки эмбриогенеза, наиболее выраженный спад - на 12-e, постепенное нарастание - к моменту рождения. Амплитуда изменений зависит от функциональной активности слоя и убывает в направлении: трабекулярный миокард - компактный миокард. Регрессионное уравнение динамики миофибрнллярно-митохондриального индекса до 12-х суток пренатального развития представляет собой обращенную параболу 2-го порядка, после изменения этого параметра носили линейный характер.

При анализе данных корреляционного и регрессионного анализа нами установлено, что высокая скорость увеличения плотности упаковки миофибрилл в эмбриогенезе является фактором, тормозящим накопление гликогена и липидов, в то время как развитие митохондриального аппарата на этот процесс существенно не влияет. На наш взгляд, указанный факт обусловлен большей энергоемкостью дифференцировочных процессов миофибриллярного аппарата по сравнению с митохондриальным.

В первые дни после вылупления не происходит значительных сдвигов в скорости увеличения плотности упаковки миофибрилл. С одной стороны, это может быть связано с предшествующим активным развитием сократительного аппарата, способным обеспечить адекватное функционирование миокарда в условиях высокой двигательной активности птенца, а с другой,- одинаковыми условиями существования в пре- и постнатальном онтогенезе. В этот период параметрами, активно реагирующими на резкое повышение двигательной активности, являются относительный объем липидов, активность СДГ и, в большей степени, плотность упаковки гликогена. С момента вылупления по 3-й сутки жизни устанавливается сильная отрицательная корреляционная взаимосвязь между относительным объемом энергетических ресурсов и активностью СДГ.

С 5-х суток жизни плотность упаковки миофибрилл быстро увеличивается, в сильной положительной корреляционной зависимости с ней находилась активность СДГ. Двухфакторный дисперсионный анализ выявил более существенное влияние плотности упаковки миофибрилл на активность СДГ по сравнению с влиянием временного фактора, Регрессионный анализ подтвердил существенную взаимозависимость между относительным объемом сократительных структур и активностью СДГ. Относительный объем митохондрий до 20-х суток жизни возрастает незначительно, С 20-х по 30-е сутки постнатального онтогенеза плотность упаковки миофибрилл находится в сильной положительной корреляционной зависимости от плотности упаковки митохондрий и в положительной корреляционной зависимости средней силы от активности СДГ. Дисперсионный анализ выявил сильное влияние фактора. Еремени на активность СДГ до 20-х суток жизни, значительно ослабляющееся в дальнейшем. Результаты регрессионного анализа позволили установить существенную взаимозависимость между плотностью упаковки миофибрилл и митохондрий между 10-30-ми сутками постнатального развития. На наш взгляд, подобное соотношение связей между стереологическими и биохимическими параметрами миокарда свидетельствует о возможном усилении функциональной активности митохондрий без увеличения их плотности упаковки только до определенного уровня, после чего дальнейшая дифференцировка миокарда стимулирует экстенсивное развитие митохондриального аппарата.

С 10-х по 30-е сутки жизни происходит наиболее выраженное за весь период постнатального онтогенеза снижение плотности упаковки липидных включений, которая находится в сильной отрицательной корреляционной зависимости от относительного объема миофибрилл и митохондрий. Регрессионный анализ выявил существенную взаимозависимость между относительным объемом липидов и плотностью упаковки миофибрилл в течение 20-30-х суток жизни. На наш взгляд, наблюдаемый расход липидов связан с высокой энергоемкостью дифференцировочных процессов в миофибриллярном и митохондриальном аппаратах миокарда в этот период.

Динамика плотности упаковки миофибрилл и митохондрий, абсолютного удельного объема миофибрилл, а также миофибриллярно-митохондриального индекса в постнатальном периоде онтогенеза аппроксимируются логистической функцией. Активность СДГ описывается параболой 3-го порядка. До 20-х суток наблюдается линейное снижение относительного объема липидов, в дальнейшем динамика этого параметра аппроксимируется экспоненциальной функцией.

В конце 3-й недели жизни в миокарде цыплят устанавливается уровень структурно-функциональных взаимоотношений, сохраняющийся в дальнейшем в течение всего изученного постнатального периода. Тем не менее, активные сдвиги в динамике таких стереологических параметров, как плотность упаковки миофибрилл и митохондрий, абсолютная удельная площадь поверхности митохондрий наблюдаются до начала 2-го месяца жизни. Таким образом, завершение морфо-функциональной дифференцировки мкофибриллярного и митохондриального аппаратов миокарда цыплят происходит одновременно в конце 1-го месяца жизни.

Анализ результатов собственных исследований и сопоставление их с данными литературы позволяют выявить ряд закономерностей в становлении основных структурно-функциональных аппаратов миокарда кур и определить характер взаимосвязи между этими процессами.

В течение раннего эмбриогенеза крыс наблюдаемая нами морфологическая картина формирующегося миокарда, в целом, соответствует ряду литературных источников (П.П.Румянцев, 1967; А.А.Сосунов и др. 1987; В.Г.Шаров и др. 1988; Mark-ald, 1973). Канальцы гладкого эндоплазматического ретикулума в этот период выявить не удается. Это обстоятельство, по нашему мнению, свидетельствует об установлении направленности дифференцировочных процессов в миокарде на ранних стадиях развития в сторону выработки специфических белков.

С 10-х по 14-е сутки эмбриогенеза плотность упаковки сократительных структур, их абсолютная удельная площадь поверхности и степень ориентации существенно возрастают, обнаруживая между собой сильную положительную корреляционную взаимосвязь. Дисперсионный анализ выявил значительное влияние фактора времени на все стереологические параметры миофибриллярного аппарата, Сдвиги в стереологических параметрах, характеризующих развитие митохондриального аппарата, выражены слабее. Регрессионный анализ показал несущественную взаимозависимость между плотностью упаковки миофибрилл и митохондрий в этот период. Значительно увеличивается относительный объем гликогена и липидных включений. Между плотностью упаковки энергетических ресурсов и количественными характеристиками миофибриллярного аппарата установлена положительная корреляционная взаимосвязь средней силы. Таким образом, в период ранней дифференцировки миокарда (10-14-е сутки эмбриогенеза) наблюдается преимущественное развитие миофибриллярного аппарата и слабое положительное корреляционное взаимодействие стереологических параметров, отражающих его состояние, с количественными характеристиками митохондриального аппарата.

К 14-м суткам эмбриогенеза в миокарде обособляются трабекулярный, компактный и губчатый слои, отличающиеся по темпам дифференцировки и роли в функционировании миокарда. Сократительную активность обеспечивает, в основном, трабекулярный слой, о чем можно судить по более активному накоплению в нем сократительных структур и митохондрий по сравнению с другими слоями. Указанный факт соответствует данным Markwaid (1969), Challice, Viragh, (1974). Синусоидам губчатого слоя принадлежит ведущая роль в обеспечении кардиомиоцитов питательными веществами, что хорошо согласуется с литературными источниками (Ostadal, Schiebler, 1971).

На 16-е сутки эмбриогенеза мы наблюдали максимальное увеличение плотности упаковки сократительных структур по сравнению с относительным объемом митохондрий, а также наиболее выраженное расхождение в темпах изменения других сте-реолсгических параметров миофибриллярного и митохондриального аппаратов. С 10-х по 16-е сутки между параметрами, отражающими состояние митохондриального аппарата,- относительным объемом митохондрий, абсолютной удельной площадью поверхности и степенью ориентации - обнаруживается сильная положительная корреляционная взаимосвязь, что свидетельствует о медленной структурно-функциональной дифференцировке митохондрий в этот период. Двухфакторный дисперсионный анализ выявил несущественное влияние на стереологические параметры митохондриального аппарата, как временного фактора, так и плотности упаковки миофибрилл. Результаты регрессионного анализа позволили установить еще большее ослабление взаимозависимости между развитием сократительного и митохондриального аппаратов.

К 16-м суткам эмбриогенеза значительно снижаются темпы возрастания относительного объема гликогена и липидов. Их плотность упаковки слабо коррелирует с относительным объемом сократительных структур. Дисперсионный анализ показал существенное снижение влияния фактора времени на динамику накопления энергетических ресурсов после 14-х суток эмбриогенеза. Таким образом, накопление основной массы энергетических ресурсов происходит с 10-х по 14-е сутки пренатального развития до начала активной дифференцировки миофибриллярного и митохондриального аппаратов.

С 16-х по 22-е сутки пренатального развития относительный объем миофибрилл увеличивается более чем втрое; значительно возрастает абсолютная относительная площадь поверхности миофибрилл и резко усиливается их степень ориентации. Однако корреляционные связи между указанными параметрами ослабляются. На наш взгляд, это обусловлено тем обстоятельством, что такие стереологические характеристики миофибриллярного аппарата, как степень ориентации миофибрилл и абсолютная удельная площадь поверхности, претерпевая существенные сдвиги на предыдущих этапах развития, гораздо сильнее приближаются к своему дефинитивному уровню, чем плотность упаковки миофибрилл.

Следует отметить, что в течение всего пренатального периода развития степень упорядоченности миофибрилл миокарда крыс сохраняется на более низком уровне по сравнению с плотностью упаковки миофибриллярного аппарата, чем это наблюдается в эмбриогенезе кур. По нашему мнению, указанный факт обусловлен тем, что сократительная активность миокарда куриных зародышей вплоть до рождения обеспечивается меньшим объемом миофибрилл, чем функционирование миокарда крысиных эмбрионов.

Начиная с 16-х суток эмбриогенеза происходит активная дифференцировка митохондриального аппарата, о тесной сопряженности структурной и функциональной сторон которой свидетельствует сильная положительная корреляционная взаимосвязь между плотностью упаковки митохондрий, степенью ориентации крист, их количеством и активностью СДГ. Двухфакторный дисперсионный анализ установил значительно более выраженное влияние плотности упаковки миофибрилл на стереологические параметры митохондриального аппарата, чем влияние временного фактора. Более чем в два раза по сравнению с 12-ми сутками возрастает абсолютная удельная площадь поверхности митохондрий. Указанный факт, на наш взгляд, служит подтверждением того обстоятельства, что одним из механизмов увеличения объема митохондриального аппарата является деление митохондрий, Это хорошо согласуется с мнением В.А.Фролова (1975) и Legato (1972). Регрессионный анализ показал значительное возрастание взаимозависимости между изменением стереологических параметров миофибриллярного и митохондриального аппаратов по сравнению с предыдущим периодом. В ходе эмбриогенеза в кар-диомиоцитах крыс происходит снижение количества малоэффективных, пузыревидных митохондрий, количество высокоэффективных органелл постоянно увеличивается, что хорошо согласуется с литературными данными (Hibbs, 1956; Cedergren, Harary, 1964).

В пренатальном периоде онтогенеза динамики стереологических параметров миофибриллярного аппарата описываются различного рода параболами, причем изменение характера функции для всех параметров происходит сразу после рождения. Обращенной параболой 2-го порядка с максимумом на 16-е сутки описывается также динамика миофибриллярно-митохондриального индекса между 14-ми и 18-ми сутками эмбриогенеза; в дальнейшем происходят, линейные; изменения этого параметра. Плотность упаковки митохондрий и активность СДГ в позднем пренатальном онтогенезе и в первые дни жизни аппроксимируются логистической функцией. До 1С-х суток эмбриогенеза наблюдается параболическая зависимость между временным фактором и относительным объемом энергетических ресурсов. В дальнейшем изменения плотности упаковки гликогена и яипидов носят линейный характер.

Таким образом, в развитии миофибриллярного и митохондриального аппаратов миокарда крыс в пренатальном периоде онтогенеза целесообразно выделить два периода. Первый, заканчивающийся к 10-м суткам эмбриогенеза, связан с преимущественным развитием миофибриллярного аппарата; к этому сроку происходит накопление основной массы гликогена и липидов. Во втором периоде наблюдается активная дифференцировка как сократительного, так и митохондриального аппарата. Результаты корреляционного и регрессионного анализа позволяют сделать вывод об индуктивном воздействии дифференцировки миофибриллярного аппарата на развитие митохондриального. По-видимому, толчком к активной дифференцнровке митохондриального аппарата служит достижение определенного уровня структурных взаимоотношений между сократительным и митохондриальным аппаратом, в данном случае - трехкратное превышение плотности упаковки миофйбрилл над относительным объемом митохондрий, наблюдаемое на 15-е сутки эмбриогенеза. Следует также отметить, что на протяжении пренатального периода развития различия между скоростью дифференцировки слоев миокарда больше выражены в отношении миофибриллярного, чем митохондриального аппарата, По нааему мнению, указанный факт подтверждает ведущую и определяющую роль дифференцировки миофибриллярного аппарата по отношению к формированию других структурно-функциональных компартментов кардиомиоцита.

У новорожденных крысят существенные и разнонаправленные сдвиги претерпевает активность СДГ и плотность упаковки гликогена. Увеличение количества энергетических ресурсов, наблюдаемое в пренатальном периоде развития, сменяется их расходованием, что хорошо согласуется с данными Л.М.Непомнящих (1972) и Schiebler, Wolff (1966). Необходимо отметить, что в позднем пренатальном периоде значительно увеличивается плотность упаковки митохондрий и степень ориентации крист, в то время как изменение других стереологических параметров, характеризующих митохондриальный и миофибриллярный аппарат, происходит темпами, наблюдающимися в предшествующем периоде. По нашему мнению, активная структурная дифференцировка митохондриального аппарата перед рождением является фактором, обусловливающим резкое возрастание активности СДГ в миокарде новорожденных крыс.

В первые 10 дней жизни происходит равномерное развитие миофибриллярного и митохондриального аппаратов. Установлена сильная положительная корреляционная взаимосвязь между относительным объемом миофибрилл, митохондрий, степенью ориентации митохондриальных крист и активностью СДГ. Регрессионный анализ выявил существенную взаимозависимость между плотностью упаковки митохондрий и миофибрилл в этот период. Изменения большинства стереометрических параметров носят линейный характер, Дисперсионный анализ показал, что влияние фактора времени на количественные характеристики миофибриллярного и митохондриального аппаратов по сравнению с эмбриональным развитием значительно ослаблялось. Таким образом, достигнутый к концу пренатального периода развития уровень структурно-функциональных взаимоотношений между сократительным и митохондриальным аппаратами сохраняется в течение раннего постнатального онтогенеза и является оптимальным для поддержания адекватного функционирования миокарда. В целом, полученные нами стереометрические данные о раннем постнатальном развитии миокарда крыс соответствуют литературным источникам (П.А.Дробышева, 1972; Pageetal., 1974, 1979).

В указанный период наблюдается дальнейшее снижение количества гликогена и липидов, происходящее равномерными темпами. Дисперсионный анализ установил сильное (свыше 80Z) влияние фактора времени на динамику относительного объема энергетических ресурсов. Между плотностью упаковки миофибрилл и относительным объемом гликогена установлена отрицательная корреляционная взаимосвязь средней силы, а между первой и относительным объемом гликогена - сильная отрицательная корреляция. Регрессионный анализ выявил существенную взаимосвязь между плотностью упаковки гликогена и относительным объемом миофибрилл. Таким образом, развитие миокарда в раннем постнатальном периоде связано в быстрым расходованием энергетических запасов.

С 10-х по 20-е сутки жизни происходит быстрая дифференцировка митохондриального аппарата. Значительные сдвиги испытывают большинство стереологических параметров, отражающих его состояние. В этот период обнаружена сильная положительная корреляция между плотностью упаковки митохондрий, степенью ориентации крист и активностью СДГ. Количественные характеристики миофибриллярного аппарата изменяются слабо. Двухфакторный дисперсионный анализ установил более существенное влияние фактора времени, чем плотности упаковки миофибрилл, на стереологические характеристики митохондриального аппарата. К концу 3-й недели жизни между сократительным и митохондриальным аппаратами устанавливается новый уровень структурно-функциональных взаимоотношений, который в дальнейшем сохраняется в течение всего изученного постнатального периода развития. Морфо-функциональная дифференцировка миофибриллярного аппарата завершается к концу 3-й недели жизни, что хорошо согласуется с литературными данными Anversa et al, (1980), Hirakov et al, (1980), Olivetti (1980). После указанного срока не наблюдается также выраженных изменений стереологических параметров митохондриального аппарата, однако активность СДГ существенно возрастает вплоть до начала 2-го месяца постнатального онтогенеза. Таким образом, морфо-биохимическая дифференцировка митохондриального аппарата завершается к концу 1-го месяца жизни. Анализ результатов собственных исследований и литературных данных позволяет установить характер взаимодействия между дифференцировкой миофибриллярного и митохондриального аппаратов, а также определить состояние энергетического обмена на различных этапах пре- и постнатального развития крыс.

У человека электронно-микроскопические данные о структуре кардиомиоцитов в эмбриональном периоде развития, в целом, соответствуют данным П.П.Румянцева (1982), В.Г.Шарова и соавт. (1988), Markwald (1973).

На 4-й неделе пренатального развития в миокарде человека наблюдается обособление трабекулярного, губчатого и компактного слоев. Губчатый слой, благодаря наличию синусоидов, обеспечивает адекватное питание миокарда, что согласуется с данными Ostadal, Schiebler (1971). Дифференцировка трабекулярного слоя заметно опережает развитие губчатого и компактного слоев, о чем мы судили по более выраженному сократительному и митохондриальному аппарату в трабекулярном слое. Таким образом, трабекулярный слой миокарда на ранних стадиях развития играет ведущую роль в функциональной активности органа. На 4-й неделе эмбриогенеза компактный и губчатый слои практически не отличаются по степени выраженности миофибриллярного аппарата, а плотность упаковки митохондрий в компактном слое значительно меньше, что хорошо согласуется с данными Lichnovsky (1984). Абсолютная удельная площадь поверхности митохондрий во всех слоях миокарда превышает площадь контакта с цитоплазмой сократительных структур, что, по нашему мнению, обусловлено спецификой обменных процессов, происходящих на поверхности миофибрилл и митохондрий, возникающей на самых ранних стадиях кардиогенеза. Плотность упаковки гликогена и липидов в трабекулярном миокарде составляет значительно меньшую величину, чем в губчатом и компактном слоях, что подтверждает выявленную нами ранее в кардиогенезе других позвоночных закономерность, свидетельствующую о тормозящем влиянии дифференцировки основных структурно-функциональных аппаратов миокарда на скорость"накопления энергетических ресурсов.

В течение 4-6-й недель пренатального развития происходят существенные изменения в соотношениях стереологических характеристик различных слоев миокарда, Значительного развития достигает миофибриллярный и митохондриальный аппарат компактного слоя, значения его стереологических параметров к 6-й неделе эмбриогенеза сопоставимы с количественными характеристиками трабекулярного. Регрессионный анализ показал, что взаимозависимость между плотностью упаковки митохондрий и миофибрилл более существенна в трабекулярном слое по сравнению с компактным. В этот период между динамикой относительного объема миофибрилл и митохондрий в трабекулярном миокарде - установлена сильная положительная корреляционная взаимосвязь. Таким образом, наиболее активному в функциональном отношении слою присуще равномерное и пропорциональное развитие сократительного и митохондриального аппаратов.

Дисперсионный анализ выявил наиболее выраженное влияние фактора времени в этот период на плотность упаковки митохондрий в компактном слое, их абсолютную удельную площадь поверхности в компактном и трабекулярном слоях, а также на степень ориентации миофибрилл. Двухфакторный дисперсионный анализ установил, что на относительный объем митохондрий в равной степени влияют временной фактор и плотность упаковки миофибрилл. Положительная корреляционная взаимосвязь средней силы между плотностью упаковки миофибрилл и их степенью ориентации свидетельствует о более быстром усилении упорядоченности в расположении миофибрилл по сравнению с увеличением их относительного объема.

В указанный период в митохондриальном аппарате устанавливаются следующие корреляционные связи: сильная положительная - между плотностью упаковки митохондрий и их абсолютной удельной площадью поверхности, слабая положительная - между относительным объемом митохондрий и степенью ориентации крист, а также между первым из параметров и количеством крист. Подобное распределение связей отражает активную структурную дифференцировку митохондриального аппарата, в то время как качественные изменения митохондрий выражены слабее.

До 6-й недели эмбриогенеза наблюдается существенное возрастание плотности упаковки гликогена и липидов, которое слабо коррелирует с динамикой относительного объема основных структурно-функциональных аппаратов миокарда в компактном слое и сильно - в трабекулярном, что связано с более выраженным накоплением энергетических ресурсов в функционально менее активном слое.

В течение 7-8-й недели пренатального развития обращает на себя внимание резкое ослабление корреляционной взаимосвязи между плотностью упаковки митохондрий и их абсолютной удельной площадью поверхности, обусловленное активным увеличением последней. На наш взгляд, указанное обстоятельство связано с размножением митохондрий, На 8-й неделе эмбриогенеза мы наблюдали появление двух типов митохондрий, что согласуется с литературными данными (Б.Г.Шаров и соавт. 1988).

В период с б-й по 10-ю неделю эмбриогенеза снижаются темпы накопления гликогена и липидов. Регрессионный анализ установил параболическую зависимость между временным фактором и плотностью упаковки энергетических ресурсов с 4-й по 10-ю недели эмбрионального развития.

В позднем эмбриональном и плодном периодах пренатального развития наблюдаются существенные изменения в динамиках таких стереологических параметров миофибрилляркого аппарата, как степень ориентации миофибрилл и их абсолютная удельная площадь поверхности. До 12-й недели эмбриогенеза абсолютную удельную площадь поверхности сократительного аппарата описывает обращенная парабола 3-го порядка; в дальнейшем этот параметр характеризует линейная функция, Степень ориентации миофибрилл в указанный период описывает обращенная парабола 2-го порядка, после 16-й недели пренатального развития установлена линейная зависимость между указанным параметром и временным фактором. Темпы увеличения плотности упаковки миофибрилл существенно изменяются после б-го месяца внутриутробного развития, функцией, описывающей динамику этого параметра в течение пренатального онтогенеза, является обращенная парабола 3-го порядка.

Дисперсионный анализ выявил более существенное влияние фактора времени на степень ориентации миофибрилл и их абсолютную удельную площадь поверхности до момента изменения характера описывающих их динамику регрессионных функций, а сила влияния фактора времени на относительный объем миофибрилл значительно уменьшается только после б-го месяца пренатального периода. Корреляционный анализ установил сильную положительную корреляционную взаимосвязь между плотностью упаковки миофибрилл и их абсолютной удельной площадью поверхности в течение б-12-й недели эмбриогенеза, после чего наблюдалось существенное ослабление этой связи. С 8-й по 14-ю неделю между относительным объемом миофибрилл и их степенью ориентации положительная корреляционная взаимосвязь имеет среднюю силу, после 3-го месяца пренатального онтогенеза эта связь становится слабой. Таким образом, развитие миофибриллярного аппарата миокарда человека во внутриутробном периоде связано с быстрым достижением значений, близких к дефинитивному уровню, таких параметров, как степень ориентации миофибрилл и их абсолютная удельная площадь поверхности, что соответствует дифференцированной морфологической структуре миофибриллярного аппарата, наблюдаемой к концу 5-го месяца плодного периода.

Митохондриальный аппарат после 8-й недели эмбриогенеза отличается нарастанием качественных изменений, выражающихся в значительном увеличении среднего количества крист в одной митохондрии и резким усилением степени ориентации крист. Наиболее существенные сдвиги указанных параметров наблюдаются между 6-й неделей и 6-м месяцем внутриутробного развития. Между ними установлена сильная положительная корреляционная взаимосвязь на протяжении всего пренатального онтогенеза.

Плотность упаковки митохондрий в течение позднего эмбрионального и плодного периода возрастает менее активными темпами, чем на протяжении 4-8-й недель пренатального развития. Заметное возрастание относительного объема митохондрий наблюдается в конце плодного периода развития. В течение 2-8-го месяца пренатального онтогенеза между плотностью упаковки митохондрий и степенью их ориентации установлена положительная корреляционная взаимосвязь средней силы, а между первой и абсолютной удельной площадью поверхности митохондрий - сильная положительная корреляция. Регрессионный анализ показал существенное снижение взаимозависимости между относительным объемом митохондрий и миофибрилл в этот период, но возрастание ее между плотностью упаковки сократительных структур, количеством митохондриальных крист и их степенью ориентации. Двухфакторный дисперсионный анализ показал, что влияние плотности упаковки миофибрилл на стереологические параметры митохондриального аппарата, отражающие его качественные изменения, в этот период выражено гораздо сильней, чем влияние фактора времени. Динамики среднего количества крист и степени их ориентации в указанный период хорошо описывает обращенная парабола 3-го порядка, в то время как изменения других стереологических параметров митохондриального аппарата носят линейный характер.

Изменения миофибриллярно-митохондриадьного индекса после 6-й недели эмбриогенеза имеют однонаправленный характер в трабекулярном и компактном сдоях миокарда и наиболее выражены до 6-го месяца плодного периода. В пренатальном онтогенезе динамику этого параметра аппроксимирует обращенная парабола 3-го порядка, пик которой наблюдается на 6-м месяце внутриутробного развития.

Таким образом, в пренатальном онтогенезе человека развитие митохондриального аппарата имеет трехфазный характер. До 8-й недели эмбриогенеза выражен рост относительного объема митохондрии в цитоплазме без существенных качественных их изменении; этот период отмечен разнонаправленностью сдвигов, испытываемых миофибриллярно-митохондриальным индексом в различных слоях миокарда. После 2-го месяца внутриутробного развития, на фоне постоянно возрастающего разрыва между плотностью упаковки миофибрилл, происходит быстрая дифференцировка митохондриального аппарата, связанная с увеличением количества крист в одной митохондрии и усилением степени ориентации крист. Начиная с 8-го месяца пренатального онтогенеза плотность упаковки митохондрий вновь активно возрастает, при этом ослабевает выраженность качественных изменений митохондрий; миофибридлярно-митохондриадьный индекс достигает пика на 8-м месяце плодного периода, после чего величина его постоянно снижается.

Установленная нами периодизация в развитии митохондриального аппарата позволяет предположить, что при достижении к 2-му месяцу пренатального развития определенного уровня структурной дифференцировки, под которой мы подразумеваем пространственные и количественные взаимоотношения между миофибриллами и митохондриями, индуктивное влияние сократительного аппарата сказывается, в основном, на качественных параметрах митохондриального аппарата - среднем количестве крист в одной митохондрии и степени их ориентации. Однако дальнейшее нарастание функциональной активности митохондрий становится невозможным без экстенсивных сдвигов, обусловливающих снижение миофибриллярно-митохондриального индекса, Таким образом, в позднем пренатальном периоде увеличение эффективности работы митохондриального аппарата происходит как за счет нарастания относительного объема митохондрии в цитоплазме, так и за счет их качественных изменении.

После рождения, наиболее выраженные сдвиги наблюдаются со стороны плотности упаковки гликогена. Обращают на себя внимание результаты дисперсионного анализа, выявившего слабое влияние временного фактора на этот параметр. В первые месяцы жизни в меньшей степени, чем плотность упаковки гликогена, изменяются относительный объем липидов и стереологи-ческие параметры митохондриального аппарата. В зтот период установлена сильная положительная корреляционная взаимосвязь между всеми количественными характеристиками митохондриального аппарата, сильная отрицательная корреляция наблюдается между плотностью упаковки липидов и относительным объемом митохондрий, а между последней и относительным объемом гликогена отрицательная корреляционная связь - средней силы. Количественные характеристики миофибриллярного аппарата после рождения изменяются темпами, наблюдаемыми в позднем плодном периоде развития. Регрессионный анализ выявил существенное ослабление взаимосвязи между относительным объемом миофибрилл и стереологическиыи параметрами митохондриального аппарата.

Таким образом, сопоставив полученные нами данные о состоянии - стереологических параметров миофибриллярного и митохондриального аппаратов миокарда человека в раннем онтогенезе с данными литературы и между собой, возможно выявление периодичности в развитии митохондриального аппарата, а также установление степени влияния на этот процесс дифференцировки миофибрилл.

Морфология развивающегося сердца
Морфология развивающегося сердца (структура, ультраструктура, метаболизм). Днепропетровск, 1995.- 220 с.
  -   Предисловие
  -   Часть 1. Общие закономерности развития структурной организации сердца человека:
  -     -   1.1. Морфология предсердий в онтогенезе человека;
  -     -   1.2. Морфология желудочков в онтогенезе человека.
  -   Часть 2. Количественный структурно-функциональный анализ развития сердца позвоночных животных на этапах индивидуального развития:
  -     -   2.1. Структурная организация сердца в онтогенезе амфибий;
  -     -   2.2. Структурная организация сердца в онтогенезе птиц;
  -     -   2.3. Структурная организация сердца в онтогенезе млекопитающих.
  -   Часть 3. Пути преобразования энергии в развивающихся кардиомиоцитах:
  -     -   3.1. Энергообмен миокарда в онтогенезе амфибии;
  -     -   3.2. Энергообмен миокарда в онтогенезе птиц;
  -     -   3.3. Энергообмен миокарда в онтогенезе млекопитающих.
  -   Часть 4. Сопоставительный и математический анализ структурно-функциональных характеристик развивающегося миокарда:
  -     -   4.1. Онтогенетический аспект развития сократительного аппарата сердца;
  -     -   4.2. Филогенетический аспект развития сократительного аппарата сердца.
  -   Заключение.
Поддержка
 © 2008-2015 Cardiogenes.dp.ua
© обработка Dr. Andy  
Key words: heart, cardiogenesis, cardiac development. Ключевые слова: сердце, кардиогенез, гистогенез миокарда эндокарда эпикарда, ангиогенез, развитие сердечно-сосудистой системы, васкулогенез, эмбриология, теоретическая кардиология, врожденные пороки сердца, струны сердца. Миокард человека и животных, наука, медицина, ветеринария, сердце.
Rambler's Top100 li MyCounter